Evaluación de la actividad citotóxica y construcción de una inmunotoxina (it) de curcina obtenida de semillas de Jatropha curcas L.

Abstract

La curcina es una proteína inactivadora de ribosomas (RIP) que se encuentra en el endospermo de semillas de Jatropha curcas, es una enzima N-glicosidasa que actúa sobre el ARNr bloqueando la síntesis de proteínas, y generando efecto citotóxico en células de mamíferos a través de apoptosis; esta condición le permite constituir la porción tóxica de una inmunotoxina. Las inmunotoxinas son moléculas con potencial uso en terapias contra el cáncer debido a que están conformadas por un ligando asociado a tumores y una toxina; esto les permite unirse a receptores específicos en la superficie celular, ser internalizadas vía endocitosis y tener efectos tóxicos para eliminar solo a las células tumorales. El objetivo de este estudio fue construir una inmunotoxina a partir de curcina y un anticuerpo monoclonal contra Her2 mediante oxidación de azúcares y aminación reductiva. Her2 es un antígeno asociado al cáncer con gran potencial para el desarrollo de terapias dirigidas. La curcina aislada de la torta residual de Jatropha curcas L mostró una masa molecular de 32.7 kDa, pI de 8.70 y 4.14% de azúcares. La actividad N-glicosidasa se determinó en ARNr de semillas de Jatropha curcas L, luego de incubación con esta RIP y tratamiento con anilina ácida; la presencia del fragmento Endo confirmó esta actividad enzimática. Los azúcares de curcina fueron oxidados con NaIO4 y los aldehídos generados se aminaron con el anti-Her2 bajo condiciones reductoras. La unión entre ambas proteínas fue comprobada y validada por análisis de inmunodetección. Los efectos citotóxicos fueron evaluados in vitro en las líneas celulares de cáncer de mama SK-BR-3 (Her2+) y MDA-MB-231 (Her2-) y en fibroblastos. Los valores de CI50 para curcina fueron estadísticamente iguales (p<0.05) para los cultivos cancerígenos, con valores de 15.5 + 8.3 y 18.6 + 2.4 μg/mL respectivamente y diferentes respecto a fibroblastos (353.4 + 41.9 μg/mL). Mientras que para la inmunotoxina fueron de 2.2 + 0.08 μg/mL para SK-BR-3, 147.6 + 2.5 μg/mL para MDA-MB-231 y 16.7 + 2.8 μg/mL para fibroblastos. Estos valores demostraron el efecto tóxico diferencial de la inmunotoxina hacia células Her2+ y Her2- (p<0.05). La inmunotoxina fue siete veces más tóxico para la línea SK-BR-3 que la curcina y ocho veces menos tóxica para la línea MDA-MB-231. Estos resultados permiten concluir que la inmunotoxina construida por curcina y un anticuerpo contra Her2 mediante aminación reductiva puede ser un candidato terapeútico contra el receptor Her2.