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Título: Evaluación de la actividad citotóxica y construcción de una inmunotoxina (it) de curcina obtenida de semillas de Jatropha curcas L.
Autor: JARAMILLO QUINTERO, LIDIA PATRICIA
ID del Autor: 59615
Contribuidor: MARTINEZ AYALA, ALMA LETICIA
ID del contribuidor: 120486
Resumen: La curcina es una proteína inactivadora de ribosomas (RIP) que se encuentra en el endospermo de semillas de Jatropha curcas, es una enzima N-glicosidasa que actúa sobre el ARNr bloqueando la síntesis de proteínas, y generando efecto citotóxico en células de mamíferos a través de apoptosis; esta condición le permite constituir la porción tóxica de una inmunotoxina. Las inmunotoxinas son moléculas con potencial uso en terapias contra el cáncer debido a que están conformadas por un ligando asociado a tumores y una toxina; esto les permite unirse a receptores específicos en la superficie celular, ser internalizadas vía endocitosis y tener efectos tóxicos para eliminar solo a las células tumorales. El objetivo de este estudio fue construir una inmunotoxina a partir de curcina y un anticuerpo monoclonal contra Her2 mediante oxidación de azúcares y aminación reductiva. Her2 es un antígeno asociado al cáncer con gran potencial para el desarrollo de terapias dirigidas. La curcina aislada de la torta residual de Jatropha curcas L mostró una masa molecular de 32.7 kDa, pI de 8.70 y 4.14% de azúcares. La actividad N-glicosidasa se determinó en ARNr de semillas de Jatropha curcas L, luego de incubación con esta RIP y tratamiento con anilina ácida; la presencia del fragmento Endo confirmó esta actividad enzimática. Los azúcares de curcina fueron oxidados con NaIO4 y los aldehídos generados se aminaron con el anti-Her2 bajo condiciones reductoras. La unión entre ambas proteínas fue comprobada y validada por análisis de inmunodetección. Los efectos citotóxicos fueron evaluados in vitro en las líneas celulares de cáncer de mama SK-BR-3 (Her2+) y MDA-MB-231 (Her2-) y en fibroblastos. Los valores de CI50 para curcina fueron estadísticamente iguales (p<0.05) para los cultivos cancerígenos, con valores de 15.5 + 8.3 y 18.6 + 2.4 μg/mL respectivamente y diferentes respecto a fibroblastos (353.4 + 41.9 μg/mL). Mientras que para la inmunotoxina fueron de 2.2 + 0.08 μg/mL para SK-BR-3, 147.6 + 2.5 μg/mL para MDA-MB-231 y 16.7 + 2.8 μg/mL para fibroblastos. Estos valores demostraron el efecto tóxico diferencial de la inmunotoxina hacia células Her2+ y Her2- (p<0.05). La inmunotoxina fue siete veces más tóxico para la línea SK-BR-3 que la curcina y ocho veces menos tóxica para la línea MDA-MB-231. Estos resultados permiten concluir que la inmunotoxina construida por curcina y un anticuerpo contra Her2 mediante aminación reductiva puede ser un candidato terapeútico contra el receptor Her2.
Fecha de publicación: 22-ene-2015
Licencia: http://creativecommons.org/licenses/by/4.0
URI: http://rdcb.cbg.ipn.mx/handle/20.500.12273/702
Lenguaje: spa
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