Caracterización molecular de la profilina del polen de Amaranthus palmeri: clonación y generación de mutantes hipoalergénicas

Abstract

Introducción: En diversos países, los granos de polen de Amaranthus son conocidos por su alta alergenicidad. En México, el polen de Amaranthus palmeri es una importante fuente de alérgenos, sin embargo, no existen reportes sobre la prevalencia de este polen. La primera profilina alergénica fue identificada en el polen del abedul (Bet v 2) en 1991. Algunos estudios han descrito que pacientes que desarrollan alergias contra profilina de polen comúnmente presentan reactividad cruzada contra la profilina de vegetales y frutas como calabacín, apio, tomate, zanahoria, nueces, melón, naranja durazno e incluso el látex. El objetivo de este estudio fue clonar la profilina del polen de A. palmeri y obtener una variante hipoalergénica, la cual pueda ser usada como vacuna. Método: El cDNA de las profilinas de A. palmeri fueron amplificados y clonados dentro del vector pJET1.2/blunting y subclonado dentro del vector de sobreexpresión pET3a. Las profilinas fueron purificadas por cromatografía de afinidad usando como ligando poly-L-prolina acoplada a sefarosa. Además, se obtuvo el espectro de dicroísmo circular de cuatro isoformas. Las profilinas recombinantes fueron usadas para realizar prueba cutánea “prick” en pacientes alérgicos de cinco hospitales de la ciudad de México y analizadas por ELISA usando el suero de estos mismos pacientes. Resultados: Ocho profilinas fueron clonadas. El cDNA secuenciado reveló que siete de estos tienen 393 nucleótidos que codifican para 131 aminoácidos y el otro cDNA tiene 399 nucleótidos que codifican para una profilina de 133 aminoácidos. Estas isoformas fueron nombradas rAMPA ISO-1 al -8. Las isoformas ISO-3, -4, -7 y -8 fueron expresadas en E. coli como proteínas solubles, la isoforma ISO-1 fue obtenida de los cuerpos de inclusión y las isoformas ISO-2, -5 y -6 no se utilizaron para sobreexpresión. Las cinco profilinas fueron purificadas en un sólo paso por cromatografía de afinidad en las mismas condiciones que las profilinas naturales. Los espectros de dicroísmo circular obtenidos para las profilinas de A. palmeri son similares a los reportados previamente para la profilina natural de Phleum pratense. Una de las isoformas de profilina fue menos reconocida por el suero de pacientes alérgicos. Conclusiones: La isoforma 1 y 7 de las profilinas del polen de A. palmeri podría ser usada como vacuna para pacientes alérgicos a profilina.