DSpace Community:http://rdcb.cbg.ipn.mx/handle/20.500.12273/412023-11-04T02:13:02Z2023-11-04T02:13:02ZEvaluación del efecto antinociceptivo y mecanismo de acción del ácido docosahexaenoico (DHA) en un modelo murino de dolor neuropáticoLANDA JUAREZ, ARIZAI YOLIAhttp://rdcb.cbg.ipn.mx/handle/20.500.12273/7312020-07-12T01:46:29Z2019-03-22T00:00:00ZTitle: Evaluación del efecto antinociceptivo y mecanismo de acción del ácido docosahexaenoico (DHA) en un modelo murino de dolor neuropático
Author: LANDA JUAREZ, ARIZAI YOLIA
Contributor: CHAVEZ PIÑA, ARACELY EVANGELINA
Abstract: Diabetic neuropathy is not an entity of the disease, but a series of diseases or injuries with a set of symptoms and signs, where the understanding of the pathophysiology is evolving. The management of neuropathic pain can be challenging and the drugs used in the treatment of neuropathic pain as neuromodulators (gabapentin or pregabalin) are limited by the presence of significant adverse effects. Docosahexaenoic acid (DHA) is a polyunsaturated fatty acid that has shown an antinociceptive effect in multiple pain models, such as inflammatory and neuropathic pain due to chronic constriction injury in rats; however, its mechanism of action is still not well understood. Reports suggest that DHA activates opioid signaling, but there is no information on this in a neuropathic pain model. As a result, the objectives of this study were (1) to determine the antihyperalgesic and antiallodynic effect of the peripheral administration of DHA, (2) to evaluate the participation of opioid receptors in the antihyperalgesic effect of DHA on neuropathic pain induced by streptozotocin and (3) evaluate the decrease in spinal cord expression of TNF-α and FCN-β with the administration of DHA. Female Wistar female rats were injected with streptozotocin (50 mg/kg, i.p.) to induce hyperglycemia. The formalin, Hargreaves and von Frey filament tests were used to evaluate the nociceptive activity. The intraplantar administration of DHA (100-1000 μg/paw) or gabapentin (562-1778 μg/paw) reduced the formalin-induced hyperalgesia in diabetic rats, in a dose-dependent manner. In addition, DHA (562 μg/paw) and gabapentin (1000 μg/paw) reduced thermal hyperalgesia and allodynia. Local peripheral administration of naloxone (non-selective opioid receptor antagonist, 100 μg / paw), naltrindol (selective receptor antagonist, 1 μg/paw) and CTOP (D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-Thr-NH2, μ receptor antagonist: 20 μg/paw) prevented formalin-induced hyperalgesia in diabetic rats, but not by NGTI (guanidinonaltrindole, κ receptor antagonist, 1 μg/paw). It is suggested that peripheral DHA shows an antihyperalgesic effect in neuropathic pain in the rat. In addition, the receptors δ and μ are involved in the peripheral antihyperalgesic effect of DHA in diabetic rats2019-03-22T00:00:00ZEvaluación de los mecanismos de acción de derivados de quinoxalina-7-carboxilato 1,4 di-N-óxido con actividad antiamebianaSOTO SANCHEZ, JACQUELINEhttp://rdcb.cbg.ipn.mx/handle/20.500.12273/7302020-07-12T01:47:59Z2020-01-16T00:00:00ZTitle: Evaluación de los mecanismos de acción de derivados de quinoxalina-7-carboxilato 1,4 di-N-óxido con actividad antiamebiana
Author: SOTO SANCHEZ, JACQUELINE
Contributor: RAMIREZ MORENO, MARIA ESTHER
Abstract: La amebiasis es causada por el protozoo Entamoeba histolytica que afecta a millones de personas en todo el mundo. El tratamiento estándar es el metronidazol, el cual desafortunadamente induce varios efectos secundarios y se han encontrado fallas en la terapia para el tratamiento del absceso hepático amebiano. Las quinoxalinas, son compuestos heterocíclicos que contienen un anillo de benceno y un anillo de pirazina. La oxidación de ambos nitrógenos del anillo de pirazina da como resultado derivados de quinoxalina (QdNO), que han exhibido una variedad de propiedades biológicas, incluida la actividad antiparasitaria. Sólo unos pocos estudios han investigado el mecanismo de acción antiparasitario de los QdNOs, sin embargo, su mecanismo de acción sobre E. histolytica permanece aún desconocido. Este estudio investigó el efecto amebicida de nuevos QdNOs de la serie isopropilo, de los cuales el compuesto T-116 (IC50= 2.56 μM) fue el que mejor actividad amebicida y menor toxicidad (CC50= 30.56 μM) presentó de tres compuestos evaluados (T-067, T- 098 y T-116). La evaluación del efecto de las series metilo (T-001), etilo (T-014, T-016 y T-017) e isopropilo (T-116) sobre la morfología y ultraestructura de los trofozoítos de E. histolytica, demostró que los QdNOs causan pérdida de pleomorfismo celular y reducción en el tamaño de los trofozoítos, cambios en la granularidad e inducen condensación de la cromatina nuclear y vacuolización. Estas alteraciones encontradas evidencian que tanto T-001 como T-017 causan daño celular intenso a los trofozoítos por lo cual nos pareció interesante determinar algunas de las proteínas moduladas por estos dos compuestos. Después de comparar los perfiles de proteínas, se encontraron 163 proteínas con expresión alterada en el tratamiento con T-001 y 131 con expresión alterada en el tratamiento con T-017. El análisis por espectrometría de masas nos permitió la identificación de 21 proteínas sobreexpresadas y 24 proteínas subexpresadas relacionadas con: (1) citoesqueleto y tráfico intracelular; (2) transcripción, traducción y unión a ácidos nucleicos; y (3) homeostasis redox principalmente. Además se encontró que el tratamiento con T-001 y T-017 modifica la virulencia de los trofozoítos de E. histolytica, dado que alteran la eritrofagocitosis, la adhesión, y la producción de especies reactivas del oxígeno.
Nuestros resultados muestran que el mecanismo a través del cual T-001 y T-017 ejerce su efecto sobre E. histolytica implica la alteración de funciones esenciales relacionadas con la homeostasis redox y el citoesqueleto de actina, lo que eventualmente inhiben el crecimiento de trofozoítos.2020-01-16T00:00:00ZAnálisis conformacional de la familia de proteínas reguladoras de la apoptosis Bcl-2CARO GOMEZ, LUIS ALBERTOhttp://rdcb.cbg.ipn.mx/handle/20.500.12273/7292020-07-12T01:47:05Z2019-12-17T00:00:00ZTitle: Análisis conformacional de la familia de proteínas reguladoras de la apoptosis Bcl-2
Author: CARO GOMEZ, LUIS ALBERTO
Contributor: ZAMORANO CARRILLO, ABSALOM
Abstract: All multicellular organisms must maintain precise regulation of their cell mass turnover during the entirety of their lifespan to avoid a variety of health disorders such as cancer, autoimmunity, and neurodegenerative dysfunction. Damaged or unwanted cells are eliminated by one of the several cell death types, with apoptosis being the most common process in mammals. This mechanism is triggered by activation of death receptors on the cell surface (extrinsic pathway) or in response to cellular stress involving the mitochondria (intrinsic pathway).
The proteins of the Bcl-2 family are considered as the major regulators of apoptosis. The mutual interactions among Bcl-2 family protein members regulate these events. This family is composed of proteins that either impede (anti-apoptotic) or promote (pro-apoptotic) apoptosis, or regulate pro-apoptotic and anti-apoptotic members of the family.
Bcl-2 protein is the archetypical member of the anti-apoptotic family, acts as the primary gatekeeper of the external mitochondrial membrane, supervising the release of cytochrome c from this organelle to the cytosol during apoptosis. Another anti-apoptotic member of the Bcl-2 family is Bcl-2A1, also known as A1/Bfl-1, expressed in several hematopoietic cell lineages, including T-helper lymphocytes, macrophages, and neutrophils. Bcl-2 and Bcl-2A1 have half-lives of 24 h and 30 min, respectively. Thus, Bcl-2 and Bcl-2A1 are fundamental regulators of programmed cell death. Both proteins are members of the Bcl-2 family that share a similar scaffold formed by four BH domains (BH1-BH4) and additionally at the C- terminus they have a transmembrane domain (TM). The main difference is that Bcl-2 contains an intrinsically disordered region (IDR) identified in this work as the flexible loop domain (FLD) while Bcl-2A1 lacks this domain (has instead a short loop). These regions connect α1 and α2 helices in each protein.
In this study, we are interested in investigating the contributions of FLD and TM domains (individually and collectively) to the structural stability, conformational dynamics, and function of Bcl-2 family proteins. We examined the conformational spaces of Bcl-2, Bcl-2A1, and two artificial constructs lacking the TM (Bcl-2ΔTM and Bcl-2A1ΔTM) using molecular dynamics simulations (MD) at different temperatures (310, 400, and 500 K).
The most important results of the MD simulations were that both TM and FLD showed a tendency to approach the core when they are present in the protein. These conformational changes block the access to the binding groove formed by BH1, BH2, and BH3 domains, thus impeding the interaction with other members of the family.
These results suggest that FLD and TM have an essential contribution to the regulation of Bcl-2 function by hindering ligand access to the binding groove.
Also, we identified and located regions rich in proline, glutamic acid, serine and threonine (PEST sites) within the FLD and short loop. These sites are susceptible to protein degradation either through μ-Calpain cleavage or ubiquitination-triggered protein degradation, thus governing the half-life of the proteins. The conformational changes shown by FLD were: to fold on itself and to approach the central core; thus, some of these PEST sites become less accessible to proteases. On the contrary, the short loop of Bcl-2A1 did not show conformational changes, therefore not hiding any of the potential PEST sites. We believe that this might explain the differences of the half-life reported for these proteins.
In summary, both TM and FLD showed a tendency to approach the core when they are present in the protein. These events might promote stabilization and compaction of Bcl-2, maintaining the overall structure through the formation of new interactions.
This information contributes to the understanding of the regulation of apoptosis by these structural elements.2019-12-17T00:00:00ZBúsqueda e identificación de microRNAs asociados con la respuesta patológica completa a la quimioterapia neoadyuvante en tumores de pacientes con cáncer de mamaGARCIA VAZQUEZ, RAULhttp://rdcb.cbg.ipn.mx/handle/20.500.12273/7282020-07-12T01:45:33Z2018-08-03T00:00:00ZTitle: Búsqueda e identificación de microRNAs asociados con la respuesta patológica completa a la quimioterapia neoadyuvante en tumores de pacientes con cáncer de mama
Author: GARCIA VAZQUEZ, RAUL
Contributor: MARCHAT MARCHAU, LAURENCE ANNIE
Abstract: El objetivo principal de la quimioterapia neoadyuvante es mejorar el pronóstico del resultado de los pacientes con cáncer de mama. Sin embargo, pocos se benefician de este tratamiento. La respuesta patológica completa (RPC) es un marcador eficaz para la predicción de beneficios clínicos a largo plazo. Desafortunadamente, entre el 50% -85% de las pacientes tienen una respuesta desfavorable a la quimioterapia. La expresión de los microRNAs (miRNAs) es útil como biomarcadores de progresión del cáncer de mama. En cambio, su potencial para identificar pacientes con RPC ha sido pobremente explorado. Este estudio se enfocó en identificar un perfil de miRNAs asociado con la RPC en pacientes con cáncer de mama triple negativo localmente avanzado (CMTNla) que recibieron una quimioterapia neoadyuvante experimental basada en 5-fluorouracilo, adriamicina, ciclofosfamida---cisplatino/Paclitaxel (FAC---CDDP/Ptx). En la cohorte de descubrimiento (10 pacientes con RPC vs 8 sin RPC), se evaluó la expresión de 754 miRNAs usando arreglos de baja densidad con sondas TaqMan. El análisis de clúster jerárquico no supervisado identificó 11 miRNAs diferencialmente significativos entre las pacientes con y sin respuesta (fold change ≥ 1.5; p ≤ 0.05). Posteriormente, la expresión diferencial de miR-30a, miR-9-3p, miR-770 y miR143-5p se validó en una cohorte independiente (12 pacientes con RPC vs 5 sin RPC). Además, el análisis de Kaplan-Meier indicó que la expresión de los cuatro miRNAs se asoció con una mayor supervivencia libre de enfermedad (SLE). La clasificación de Gene Ontology de los genes diana predichos por los miRNAs predijo que más de 200 genes podrían estar involucrados en vías de señalización relacionadas con la quimiorresistencia, tales como VEGF, FAK, WNT y AKT, principalmente. Al respecto, el miR-143-5p podría ser uno de los reguladores más activos de la respuesta a la terapia debido a que ha sido ampliamente reportado como un fuerte supresor tumoral. Por lo tanto, se investigó si la expresión de miR- 143-5p podría discriminar entre pacientes con y sin RPC en pacientes con CMTNla que recibieron la misma quimioterapia neoadyuvante: FAC---CDDP/Ptx. Los datos revelaron que miR-143-5p tiene una expresión significativamente disminuida (p < 0.0006) en pacientes que lograron la RPC en comparación con el grupo de pacientes que no respondió. El análisis de la curva característica operadora del receptor (ROC) demostró que miR-143-5p podría ser un buen predictor de la RPC (AUC = 0.849). Adicionalmente, el análisis de Kaplan-Meier identificó que los niveles de expresión bajos de miR-143-5p se asocian con una mayor SLE en pacientes con la RPC. Para obtener más información sobre las funciones celulares de miR-143-5p, primero se identificó que este miRNA está reprimido en tumores de mama y en cuatro líneas celulares de cáncer de mama en comparación con células normales. Interesantemente, la expresión ectópica de miR-143-5p inhibió la proliferación y la migración celular (excepto en MCF-7), y sensibilizó a las células cancerosas al tratamiento con cisplatino. Para descifrar las redes de señalización oncogénicas reguladas por miR-143-5p, se utilizó un arreglo de anticuerpos de fosforilación basados en análisis tipo ELISA de alto rendimiento. El perfil fosfoproteómico de la vía de señalización de PI3K/AKT reveló que miR- 143-5p redujo la expresión y la fosforilación de múltiples proteínas asociadas en las rutas de señalización celular de AKT, WNT, SAPK/JNK, FAK y JAK/STAT. Adicionalmente, el meta-análisis de expresión en una cohorte de 5,143 pacientes con cáncer de mama, arrojó que niveles bajos de expresión de miR-143-5p y GSK3-β, RAF1, Paxilina y p21CIP1 correlacionan con pobre supervivencia. Finalmente, un modelo de regulación hipotética de miR-143-5p sobre sus genes diana directos e indirectos fue provisto para agrupar la información de la modulación de las distintas rutas celulares desreguladas y su impacto sobre algunos de los fenotipos alterados en este estudio. En resumen, se identificó una nueva firma de expresión de miRNAs asociada con la RPC en CMTNla. Los cuatro miRNAs validados podrían utilizarse como biomarcadores moleculares de respuesta clínica a la RPC y de supervivencia en pacientes con este tipo de cáncer que reciben la quimioterapia neoadyuvante basada en FAC---CDDP/Ptx. Además, por sí mismo miR-143-5p también podría ser un posible predictor de la RPC a dicha terapia neoadyuvante y pronosticar una mayor SLE a través de funcionar como un regulador divergente de diversas redes de señalización celular para suprimir la proliferación y migración celular, así como quimiosensibilizar al tratamiento con cisplatino en cáncer de mama. Por lo que miR-143-5p podría también ser un candidato potencial para su evaluación terapéutica2018-08-03T00:00:00Z